微生物檢驗中菌落總數(shù)的不確定度如何評定

　　在ISO/IEC17025《校準和檢測實驗室能力的通用要求》中明確指出實驗室出具的檢測報告應包含有關(guān)評定校準或測試結(jié)果的不確定度說明，故對測量結(jié)果進行不確定度的評定成為檢測實驗室的重要內(nèi)容。下面是yjbys小編為大家?guī)�來的關(guān)于微生物檢驗中菌落總數(shù)的不確定度如何評定的知識，歡迎閱讀。

　　1 .檢驗方法

　　依據(jù) GB 4789.2-2010 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》中要求以無菌操作取檢樣25 g(ml)剪碎放于含有225 ml滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液中，經(jīng)振搖或研磨做成1︰10的均勻稀釋樣液，按照標準要求制備10倍系列稀釋樣品勻液。根據(jù)污染情況的估計，選擇2～3個稀釋度，每個稀釋度作2個平皿，每個平皿注入培養(yǎng)基約15~20 ml，并轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿使混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h±2 h。計數(shù)后以同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)報告。

　　2. 數(shù)學模型

　　設(shè)菌落總數(shù)為A，檢測結(jié)果為X，則A=X CFU/g(ml)。

　　3 .計算不確定度

　　3.1 在微生物檢驗中，樣品中細菌分布的均勻性和重復測量帶來的不確定度是影響檢驗結(jié)果準確度的主要原因，而B類不確定度分量對合成不確定度影響較少。按 GB 4789.2-2010 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》中方法，同一樣品每個稀釋度作兩個平衡樣，因此可以采用合并樣本標準差求檢測結(jié)果的不確定度 見表1。

　　3.2 從檢驗結(jié)果可知，如直接用貝塞爾公式計算合并樣本標準差，由于數(shù)據(jù)的散發(fā)性較大，計算出的合并樣本標準差很大，當樣本均值較小時其不確定度則會過大，此時可以對上述數(shù)據(jù)取對數(shù)后，計算出樣本檢驗結(jié)果對數(shù)值的均值和殘差，將中間計算結(jié)果 見表2。根據(jù)貝賽爾公式，可計算出檢測結(jié)果對數(shù)值的合并樣本標準差：

　　取置信水平P=95%，自由度ν=19，查t分布表得：

　　分布于X±0.043之間。當檢測結(jié)果以平衡樣結(jié)果平均值表示時，相對于對數(shù)值的取值再取反對數(shù)得其取值區(qū)間。這個取值區(qū)間適合于任何一次檢測。

　　3.3 例1：3#樣品，對數(shù)值的平均值為2.708，取值區(qū)間為2.665～2.751，取反對數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為462～564 cfu/g(ml)，菌落總數(shù)的取值區(qū)間為460～560 cfu/g(ml)。

　　例2：12#樣品，對數(shù)值的平均值為3.203，取值區(qū)間為3.160～3.246，取反對數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為1445～1762u/g(ml)，菌落總數(shù)的取值區(qū)間為1400～1800 cfu/g(ml)。

　　例3：18#樣品，對數(shù)值的平均值為4.0115，取值區(qū)間為3.9685～4.0545，取反對數(shù)得平衡樣平均值的取值區(qū)間為9 300～11 337 u/g(ml)，菌落總數(shù)的取值區(qū)間為9 300～11 000 cfu/g(ml)。

　　4 .小結(jié)

　　從以上計算結(jié)果可知，由于檢驗結(jié)果的散發(fā)性較大，如直接用貝賽爾公式計算合并樣本標準差所得到的不確定度不適合每一個樣本。當檢驗結(jié)果取對數(shù)后，用合并樣本標準差求檢驗結(jié)果的不確定度則使用方便，并且適合于每一個樣本。隨著檢驗結(jié)果的不斷增加，可隨時加入到合并樣本中，重新計算合并樣本標準差，更新其不確定度的取值范圍。

　　微生物檢驗中菌落總數(shù)的不確定度如何評定

　　菌落總數(shù)的不確定度可以通過重復取樣和測定的方法進行評定。通常采用3次取樣的方式，每次取樣均取同樣數(shù)量的培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)基分別接種于同一試管中，放置在適當?shù)呐囵B(yǎng)條件下培養(yǎng)，直到觀察到有菌落形成。

　　然后對3次取樣的結(jié)果進行計算和統(tǒng)計，可以得到平均菌落數(shù)和標準差。標準差反映了樣本間的差異性，如果標準差較小，則說明樣本之間的差異性較小，可以認為檢驗結(jié)果比較可靠。

　　此外，還可以通過分析取樣的誤差來評定不確定度。誤差可以分為系統(tǒng)誤差和隨機誤差兩種，系統(tǒng)誤差是由于儀器或操作方法等原因引起的誤差，隨機誤差則是由于操作者的技術(shù)水平和實驗環(huán)境等因素引起的誤差。對于微生物檢驗，系統(tǒng)誤差通常比較小，而隨機誤差則可能較大。

　　綜合考慮取樣數(shù)量、標準差和誤差等因素，可以評定微生物檢驗中菌落總數(shù)的不確定度，以便對檢驗結(jié)果進行準確的解釋和評價。