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公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師考點(diǎn)：炭疽診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則—附錄B
炭疽血清學(xué)檢查
B1 標(biāo)本的采取
在不具備細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)條件時(shí)，或者發(fā)現(xiàn)可疑的炭疽病人時(shí)，病人已經(jīng)接受了抗生素治療的條件下，可依據(jù)血清學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果確定對(duì)病人的追溯診斷。由于診斷必須由雙份血清做出，需要特別強(qiáng)調(diào)急性期血清的采取。
首份血清應(yīng)在首次檢視病人時(shí)采取，通常應(yīng)一次采取血液標(biāo)本供涂片鏡檢，細(xì)菌分離培養(yǎng)，血清學(xué)檢查及常規(guī)的血液檢查使用。血清分離后置4℃保存，待獲得恢復(fù)期血清后，一同進(jìn)行抗體檢查。
恢復(fù)期血清應(yīng)在發(fā)病后15日左右采取。
B2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)病人血液內(nèi)針對(duì)炭疽芽孢桿菌保護(hù)性抗原的抗體，試驗(yàn)方法如下。
B2.1 滴定板包被
炭疽芽孢桿菌的保護(hù)性抗原以0.05mol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.6)稀釋至30～50mg/mL，加至滴定板孔中，每孔0.1mL，4℃ 18h.次日傾去抗原液，用0.5mol/L鹽水洗板2次。
B2.2 待檢血清
待檢血清以含0.05%牛血清白蛋白的0.01mol/L PBS(pH7.2)倍比稀釋，每孔0.1mL，置37℃1h，傾去血清，以0.5mol/L鹽水洗板3次。
B2.3 耦聯(lián)酶標(biāo)記
使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊(兔)抗人IgG，或該酶標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白檢驗(yàn)已與上述抗原結(jié)合的IgG抗體。每孔加0.1mL，37℃溫育40min，傾去標(biāo)記液，以0.5mol/L鹽水洗板5次。
B2.4 顯色
每孔中加入0.1mL底物液，底物液應(yīng)在臨用時(shí)按以下配方配制：
0.1mol/L檸檬酸 2.43mL
0.2mol/L磷酸氫二鈉 2.57mL
鄰苯二胺 4mg
蒸餾水 5mL
30%過(guò)氧化氫 15mL
37℃ 20min后，每孔加2mol/L硫酸1滴終止反應(yīng)。
B2.5 結(jié)果判斷
實(shí)驗(yàn)結(jié)果可用酶標(biāo)儀判讀，被檢孔OD值達(dá)陰性血清對(duì)照孔OD值的2.1倍時(shí)，始可判為陽(yáng)性。在沒(méi)有酶標(biāo)儀的情況下，也可用目測(cè)判讀，被檢孔顯示與陰性對(duì)照孔具有明顯區(qū)別的黃褐色時(shí)，始判為陽(yáng)性。
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