衛(wèi)生資格考點：高效液相色譜(HPLC)法

　　高效液相色譜以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，是以高壓下的液體為流動相的色譜過程。通常所說的柱層析、薄層層析或紙層析就是經(jīng)典的液相色譜。所用的固定相為大于100um 的吸附劑( 硅膠、氧化鋁等)。這種傳統(tǒng)的液相色譜所用的固定相粒度大，傳質(zhì)擴散慢，因而柱效低，分離能力差，只能進行簡單混合物的分離。而高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、傳質(zhì)快、柱效高。

　　自20世紀90年代以來，用于對映體純度測定的液相色譜方法的開發(fā)，在手性化合物的分析中可能是最重要的發(fā)展。

　　用GC分析非對映體混合物是一種有效的方法。然而，它僅限于揮發(fā)性的和對熱穩(wěn)定的化合物。因此在制藥行業(yè)中更常用的是手性固定相(CSP)或在少數(shù)情況下手性移動相(CMP)的HPLC。

　　高效液相色譜的手性固定相法是指在色譜擔(dān)體上涂漬(或化學(xué)鍵合)一種能拆分對映體的手性選擇劑(又稱手性拆分劑)，利用這種手性選擇劑與兩個對映體之間的作用能力的差異而使這對對映體在色譜體系中被分離。按照手性拆分劑的不同，高效液相色譜的手性固定相可以分為六類。

　�、� 多糖聚合物型(如衍生化的纖維素、直鏈淀粉等)。

　�、� 蛋白質(zhì)親和型(如a1酸性糖蛋白，纖維水解酶等)

　�、� 高分子手性聚合物型(如網(wǎng)絡(luò)狀的Kromloo-5CHI-TBB等)。

　�、� 手性空穴型(如衍生化的β-環(huán)糊精等)。

　�、� 配位體交換型(如SumichiralOA-5000等)。

　�、� Pirkle型(如在硅膠上鍵合N-3,5-二硝基苯甲酰苯甘氨酸等)。

　　使用這類手性固定相時，對映體分子上取代基的性質(zhì)和取代基位置均會對拆分結(jié)果帶來明顯的影響。

　　在這些手性固定相上的拆分機理目前尚未完全明了，多數(shù)人認為手性固定相的拆分劑與對映體分子之間п-п作用、氫鍵作用、偶極-偶極作用以及空間立體位阻效應(yīng)是支配手性拆分的主要原因。

　　已有幾本書對手性液相色譜體系、對映體分離技術(shù)及其實際應(yīng)用的評價做出完整的綜述。目前間歇式是主要的分離方式。其特征是樣品進入色譜系統(tǒng)后，必須完全流出色譜柱后才能進行下一次的分離，所以進樣是間歇的。值得―提的是，除了對各種光學(xué)及立體異構(gòu)體的分離外，在天然藥物、生物技術(shù)生產(chǎn)的生物藥品的分離純化上，HPLC正發(fā)揮著其他技術(shù)無法比擬的作用，已有公斤級到噸級的工業(yè)化制備規(guī)模HPLC(這包括另一種類同HPLC，加上電腦控制等稱為擬移動質(zhì)色譜)，從原料的投入到雜質(zhì)與純晶的分離、收集、溶劑的回收全部自動化，而且?guī)缀踹_到了零排放的標(biāo)準。

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