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微生物檢驗(yàn)常見問題解答
你知道什么是微生物檢驗(yàn)嗎?你對微生物檢驗(yàn)常見問題了解嗎?下面是yjbys小編為大家?guī)淼奈⑸餀z驗(yàn)常見問題解答的知識,歡迎閱讀。
一、方法驗(yàn)證
1.做過驗(yàn)證的樣品微生物檢驗(yàn)方法是否都需要按照新的方法進(jìn)行重新驗(yàn)證?
答:對于微生物限度檢查的產(chǎn)品而言,由于培養(yǎng)時間調(diào)整,應(yīng)重新進(jìn)行驗(yàn)證。對于無菌檢查的產(chǎn)品而言,如果方法未作實(shí)質(zhì)性調(diào)整,可以不必重新驗(yàn)證。個別產(chǎn)品在各論中收載了新的無菌檢查方法,對這些品種,應(yīng)對收載方法的適用性進(jìn)行驗(yàn)證。
2. 以前做過無菌驗(yàn)證的品種是否需要重新按照新的標(biāo)準(zhǔn)再驗(yàn)證?
答:參見問題1。
3. “新增抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜” 比如注射用克林霉素磷酸酯屬于抗生素,是否需要重新選取濾膜再驗(yàn)證?
答:目前采用的方法如果經(jīng)驗(yàn)證表明可行,則可以繼續(xù)使用該方法。
4. 微生物方法學(xué)驗(yàn)證時,培養(yǎng)時間是否跟樣品日常檢驗(yàn)所培養(yǎng)時間一致?
答:應(yīng)該一致。
5. 微生物限度驗(yàn)證時,如果一個方法只有金葡回收率達(dá)不到要求,該方法時是否可以用來做細(xì)菌霉菌的檢測方法?
答:按藥典的規(guī)定,一個計數(shù)方法通過驗(yàn)證,是指所有試驗(yàn)菌的回收率均達(dá)到要求。如果采用各種方法以及方法的組合仍無法使金葡回收率達(dá)標(biāo),則可以采用使金葡回收率最高的方法作為計數(shù)方法。
6. 薄膜過濾的沖洗量不能超過1000ml,我公司的喹諾酮類產(chǎn)品原來的方法是每張膜沖洗量為1500和2000ml,請問有沒有合適的方法將沖洗量降至1000,各菌的回收率仍能符合規(guī)定?
答:有幾種辦法可以降低沖洗劑的用量:1)降低接觸濾膜的供試品的濃度;2)改進(jìn)沖洗的方式,如少量多次地沖洗、降低蠕動泵的轉(zhuǎn)速等;3)添加中和劑,如高價金屬離子。
7. 微生物限度檢查法規(guī)定,技術(shù)方法驗(yàn)證時,采用上述方法若還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收率達(dá)不到要求,那么選擇回收率最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品檢驗(yàn)。請問,上述方法是指僅通過一種方法還是一定要通過幾種方法聯(lián)用的?
答:應(yīng)該要把可能采用的所有方法包括方法聯(lián)用都進(jìn)行驗(yàn)證。
8. 供試品不溶于稀釋劑,同時又有抑菌性,限度檢查時應(yīng)如何消除抑菌性?
答:采用低速離心的方式,盡可能把供試品去除干凈,取離心后的上層液,進(jìn)行薄膜過濾。
9. 不溶于水的固體產(chǎn)品,加表面活性劑后,如何操作才能在方法驗(yàn)證中得到較好的回收率?
答:同問題8。
10. 有些品種2010年藥典與2005年比較檢驗(yàn)方法變了,是否需要驗(yàn)證或確認(rèn)?
答:同問題1。
二、菌種管理
1. 濃菌液的有效期該如何確定?
答:藥典沒有規(guī)定?梢酝ㄟ^實(shí)驗(yàn)確定有效期。例如,在不同的時間點(diǎn)測定濃菌液的濃度,從而判斷其有效期。
2. 藥典要求菌液在制備后2小時內(nèi)使用,若保存在2-8℃的菌懸液可在在24小時內(nèi)使用,那我們在做驗(yàn)證或陽性對照是要加一定量的菌就沒有時間進(jìn)行平板計數(shù)了,該如何確保所加菌量準(zhǔn)確?
答:藥典對稀釋菌液的使用期限作出規(guī)定,并不會影響操作過程中稀釋菌液的加入。即便不規(guī)定,也無法在準(zhǔn)確知道菌液濃度的情況下加入試驗(yàn)菌。菌液稀釋的實(shí)驗(yàn)操作和加入菌液的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)該是在同一次實(shí)驗(yàn)中完成的,要使加入的菌量符合藥典的規(guī)定,可以從濃菌液的制備方法、菌液稀釋的方法等方面進(jìn)行規(guī)范,也可以引入濁度比較的方法。
3. 菌懸液能否在倒平板之前確定菌含量?
答:活菌含量是無法確定的?偩靠梢酝ㄟ^比濁的方式確定。
4. 具體從哪些方面進(jìn)行菌種菌株的特性和純度確認(rèn)?如何操作?
答:基層的微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌種純度確認(rèn)可以考慮以下一些方面:1)形態(tài)學(xué)鑒定,包括菌落形態(tài)和染色形態(tài);2)生化鑒定,可以考慮使用API鑒定系統(tǒng)。
5. 黑曲霉凍干菌種如何轉(zhuǎn)種,傳代?
答:與其他菌種一樣,所不同的是使用的培養(yǎng)基應(yīng)改為改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。
6. 干粉狀的是否可做第0代使用?
答:只要是菌種保藏機(jī)構(gòu)提供的凍干保藏的菌種,可以確定為第0代。
7. 菌種每次傳代都要做純度、特性等的確認(rèn)嗎?
答:從外部購入的菌種,在進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)室的菌種保藏體系時,需要進(jìn)行純度和特性的確認(rèn)。以后的每次傳代,可以通過顯色培養(yǎng)基做簡單的確認(rèn)即可。
8. 如采用低溫保存菌種,需購買哪些設(shè)備?能夠到省所進(jìn)行實(shí)際操作培訓(xùn)?
答:低溫冰箱,應(yīng)能夠提供-70℃的低溫。可以到省所來培訓(xùn)。
9. 做方法驗(yàn)證時,工作用菌種能否同時操作,如何防止交叉污染?
答:可以同時操作。避免交叉污染的關(guān)鍵是無菌操作技術(shù)。
10. 是否等菌懸液的含菌數(shù)出結(jié)果后再做適用性等檢查?
答:沒有必要?蓞⒁妴栴}2。
11. 菌液制備中菌液是否都要驗(yàn)證儲存期?
答:稀釋菌液可參考藥典規(guī)定。如要保存濃菌液,則需要驗(yàn)證有效期。
12. 菌種CMCC是否可以用ATCC替代,從省所或中檢所購買的菌種是否每次都可以出具規(guī)范的COA?
答:中國藥典使用CMCC的菌種,并沒有規(guī)定可以使用其他等效的菌種。省所提供的菌種嚴(yán)格講屬于標(biāo)準(zhǔn)貯備菌種,無法提供ATCC這樣的COA。CMCC至今也無法提供這類證明。
13. 銅綠假單胞如何保藏?答:可以使用低溫冷凍保存的方法。14. 工作用菌液是否屬于亞培養(yǎng)或傳代一次?
答:工作用菌液應(yīng)屬于一次傳代。
三、微生物限度
1. 包裝材料的大腸埃希菌檢查?
答:根據(jù)包裝材料的不同,大腸埃希菌的檢查方法大致有兩種,一種是將浸提液合并后,取一部分,接種膽鹽乳糖培養(yǎng)基進(jìn)行檢查;另一種是將浸提液合并后,薄膜過濾,然后按規(guī)定的方法檢驗(yàn)。
2. 抗真菌藥品的微生物限度檢查法
答:這類產(chǎn)品的霉菌和酵母菌計數(shù)方法需要進(jìn)行調(diào)整,可以根據(jù)產(chǎn)品劑型的不同,選擇薄膜過濾法或培養(yǎng)基稀釋法等方法。
3. 為什么在日常樣品檢測中還需要做陽性對照(國外不需要)?
答:為了確保每一次檢測對可能存在的微生物都是有效的。
4. 對于同一個品種,藥典為什么不規(guī)定統(tǒng)一的檢測方法?
答:本版藥典進(jìn)行過這樣的嘗試,也有某些品種已經(jīng)收載了統(tǒng)一的檢測方法,如注射用頭孢類抗生素的無菌檢查。之所以沒有大量收載,主要是由于檢測方法還沒有經(jīng)過必要的復(fù)核。將微生物檢驗(yàn)的統(tǒng)一方法收載在品種的各論項下,始終是努力的方向。
5. 梭菌檢查中需置厭氧條件下培養(yǎng)48小時,是否指在厭氧培養(yǎng)箱中?
答:需要在厭氧培養(yǎng)裝置中進(jìn)行培養(yǎng),未必一定是厭氧培養(yǎng)箱。
6. 控制菌檢查方法驗(yàn)證時,采用多種方法均未檢出控制菌,如何處理?
答:在確保所使用的各種方法都沒有錯誤的情況下,如果仍無法使試驗(yàn)菌生長,則應(yīng)該采用薄膜過濾法進(jìn)行檢查。理由是該方法能夠最大程度地去除產(chǎn)品的抑菌作用。
7.常規(guī)的監(jiān)督抽樣檢品(包括原料)在進(jìn)行微生物限度檢查時,是否一定要進(jìn)行活螨檢查并在原始記錄與報告書中體現(xiàn)?
答:需要進(jìn)行檢查。可以在原始記錄中體現(xiàn),報告書上可以不出現(xiàn),除非當(dāng)發(fā)現(xiàn)有活螨檢出。
8. 藥包材微生物限度檢查規(guī)定了合格質(zhì)量水平,通常產(chǎn)量下取樣8個,要求8個瓶子均符合規(guī)定,如何進(jìn)行?
答:每個瓶子分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
9. 大腸埃希菌具體操作規(guī)程?
答:參見中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。
10. 動物組織及動物類原藥材的提取物入藥,是否需要檢沙門菌?
答:需要進(jìn)行沙門菌檢查。
11. 關(guān)于中國藥典菌落計數(shù)結(jié)果的判斷還存在疑義,望能舉例說明。
答:不清楚所指的存在疑義是指哪方面。2010年版對結(jié)果報告進(jìn)行了較大篇幅的修訂,目前的規(guī)定應(yīng)該比05版更為清晰、明確。
12. 需做沙門菌檢驗(yàn)樣品量的確定?
答:10g(ml)用于樣品計數(shù)檢驗(yàn)和其他控制菌檢查,10g(ml)用于沙門菌檢查,10g(ml)用于沙門菌檢查的陽性對照。需要進(jìn)行沙門菌檢查的樣品,檢驗(yàn)用量應(yīng)為30g(ml)。
13. 日常的實(shí)驗(yàn)室裝備能否達(dá)到梭菌無氧的培養(yǎng)要求?
答:完全可以?梢圆捎脜捬跖囵B(yǎng)盒(罐)。
14. 如果一個產(chǎn)品有兩個規(guī)格,是否可以取其中之一做陽性對照?
答:每個規(guī)格均需進(jìn)行陽性對照。
15. 細(xì)菌數(shù)為100g/g的,樣品稀釋級只做1:10,1:100的倍數(shù)就可以了嗎?
答:可以。
16. 培養(yǎng)時間3天,5天,可理解為72小時,120小時嗎?
答:可以。這樣更為嚴(yán)謹(jǐn)。
17.中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范“已做驗(yàn)證試驗(yàn)的供試品,在檢查時刻不必再做陽性對照”如何理解?
答:該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范中在無菌檢查法中規(guī)定“供試品無菌檢查應(yīng)進(jìn)行陽性對照試驗(yàn)”,表明不論是否進(jìn)行了方法驗(yàn)證,在產(chǎn)品的每一次檢驗(yàn)過程中,還必須進(jìn)行陽性對照。在控制菌檢查的大腸埃希菌項下,指出“已做驗(yàn)證試驗(yàn)的供試品,在該供試品檢查時不必再作陽性對照”。該規(guī)定僅適用方法驗(yàn)證與供試品檢查同時開展的情況。2005年版藥典和2010年版藥典在控制菌檢查中均對陽性對照試驗(yàn)有明確規(guī)定,“進(jìn)行供試品控制菌檢查時,應(yīng)做陽性對照試驗(yàn)。”產(chǎn)品檢驗(yàn)中應(yīng)以藥典規(guī)定為準(zhǔn)。
18. 無菌檢查和微生物限度檢查中,產(chǎn)品中規(guī)定的溶解液是否可以換成其他的溶液?
答:可以。
19. 制劑通則中,沒有微生物檢查項目的,是否可不進(jìn)行微生物項目檢測?
答:可以。主要是二部制劑通則中口服片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑。
20. 在細(xì)菌、霉菌和酵母菌計數(shù)中,適用性檢查細(xì)菌是培養(yǎng)48小時,霉菌和酵母菌是培養(yǎng)72小時,供試品檢查中細(xì)菌是培養(yǎng)3天,霉菌和酵母菌是培養(yǎng)5天,那方法驗(yàn)證中應(yīng)參照哪個時間進(jìn)行培養(yǎng)。
答:應(yīng)按照供試品檢驗(yàn)時的條件,即細(xì)菌3天,霉菌和酵母菌5天。
21. 測定純化水微生物限度時,每張濾膜過濾量是多少合適?需要先稀釋嗎?過濾完后需不需要沖洗?假如我取10ml純化水通過雙杯體封閉式薄膜過濾器過濾,每張濾膜上的計數(shù)是以5ml為單位還是10ml為單位?
答:過濾量應(yīng)以培養(yǎng)后出現(xiàn)的微生物數(shù)不超過100cfu/膜為標(biāo)準(zhǔn)。一般可不稀釋。不需要沖洗。每張濾膜的過濾量為5ml。
22. 2010藥典中關(guān)于純化水的微生物限度是:細(xì)菌、霉菌及酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個。這句話的意思是細(xì)菌總數(shù)每1ml不得過100個,霉菌及酵母菌總數(shù)不得過100個,還是細(xì)菌+霉菌+酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個。如果是三者總數(shù)的話,那細(xì)菌總數(shù)限度是多少?霉菌及酵母菌總數(shù)限度又是多少?
答:是總數(shù)不得過100個。沒有必要考慮各自的限度值。
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