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ecor1限制酶識(shí)別序列的特點(diǎn)是什么

時(shí)間:2022-03-25 12:11:19 生物 我要投稿

ecor1限制酶識(shí)別序列的特點(diǎn)是什么

  EcoRⅠ是從大腸桿菌R菌株中分離出來的第一個(gè)限制酶,下面是百分網(wǎng)小編給大家整理的ecor1限制酶識(shí)別序列的特點(diǎn),希望能幫到大家!

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  EcoRⅠ切割位點(diǎn):

  5'-G AATTC-3'

  3'-CTTAA G-5' 序列,切割位點(diǎn)在G與A之間,形成黏性末端。

  限制酶的定義

  限制性核酸內(nèi)切酶是可以識(shí)別特定的核苷酸序列,并在每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵進(jìn)行切割的一類酶,簡稱限制酶。根據(jù)限制酶的結(jié)構(gòu),輔因子的需求切位與作用方式,可將限制酶分為三種類型,分別是第一型(Type I)、第二型(Type II)及第三型(Type III)。Ⅰ型限制性內(nèi)切酶既能催化宿主DNA的甲基化,又催化非甲基化的DNA的水解;而Ⅱ型限制性內(nèi)切酶只催化非甲基化的DNA的水解。III型限制性內(nèi)切酶同時(shí)具有修飾及認(rèn)知切割的作用。

  限制酶的由來

  一般是以微生物屬名的第一個(gè)字母和種名的前兩個(gè)字母組成,第四個(gè)字母表示菌株(品系)。例如,從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內(nèi)切酶稱為Bam H,在同一品系細(xì)菌中得到的識(shí)別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶,可以編成不同的號(hào),如HindⅡ、HindⅢ,HpaI、HpaⅡ,MboI、MboⅡ等。

  別名:Endodeoxyribonuclease簡稱限制酶

  酶反應(yīng) 限制性內(nèi)切酶能分裂DNA分子在一限定數(shù)目的專一部位上。它能識(shí)別外源DNA并將其降解。

  單位定義:在指明pH與37℃,在0.05mL反應(yīng)混合物中,1小時(shí)消化1μg的λDNA的酶量為1單位。

  性狀制品不含非專一的核酸水解酶(由10單位內(nèi)切酶與1μg λDNA,保溫16小時(shí)所得的凝膠電泳圖譜的穩(wěn)定性表示),這類酶主要是從原核生物中分離出來的,迄今已經(jīng)從近300多種不同的微生物中分離出約4000種限制酶。

  限制酶的類型

  根據(jù)限制酶的結(jié)構(gòu),輔因子的.需求切位與作用方式,可將限制酶分為三種類型,分別是第一型(Type I)、第二型(Type Ⅱ)及第三型(Type Ⅲ)。

  第一型限制酶

  同時(shí)具有修飾(modification)及識(shí)別切割(restriction)的作用;另有識(shí)別(recognize)DNA上特定堿基序列的能力,通常其切割位(cleavage site)距離識(shí)別位(recognition site)可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)。例如:EcoB、EcoK。

  第二型限制酶

  只具有識(shí)別切割的作用,修飾作用由其他酶進(jìn)行。所識(shí)別的位置多為短的回文序列(palindrome sequence);所剪切的堿基序列通常即為所識(shí)別的序列。是遺傳工程上,實(shí)用性較高的限制酶種類。例如:EcoRI、HindⅢ。

  第三型限制酶

  與第一型限制酶類似,同時(shí)具有修飾及識(shí)別切割的作用?勺R(shí)別短的不對(duì)稱序列,切割位與識(shí)別序列約距24-26個(gè)堿基對(duì)。例如:HinfⅢ。

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  細(xì)菌反擊

  細(xì)菌容易被噬菌體感染,如已經(jīng)在每月推薦分子中看到的phix174噬菌體。許多細(xì)菌用切割外來DNA的方法進(jìn)行自我保護(hù),如切割感染性噬菌體的DNA。這些細(xì)菌產(chǎn)生一種能切割DNA的核酸內(nèi)切酶,一旦發(fā)現(xiàn)外來DNA便將其切割,因此它們有效地限制了噬菌體對(duì)細(xì)菌的感染,故這種核酸內(nèi)切酶被稱為限制酶。

  分子剪刀

  每種限制酶特異識(shí)別專一DNA序列,并在切割位點(diǎn)將其準(zhǔn)確切割。例如,EcoR1切割GAATTC序列,切割位點(diǎn)在G與A之間。細(xì)菌將自身的DNA甲基化修飾,防止了被自身核酸內(nèi)切酶降解。這些甲基化基團(tuán)被裝到DNA大溝的腺嘌呤或胞嘧啶上(依細(xì)菌種類而定),使限制酶不能與DNA序列結(jié)合,但又不影響這些DNA序列上遺傳信息的正常識(shí)別與表達(dá)。噬菌體DNA沒有這些保護(hù)性的甲基化基團(tuán),所以會(huì)被降解。每種細(xì)菌都有一種或幾種用來切割特異DNA序列的限制酶,還有與限制酶配對(duì)的甲基轉(zhuǎn)移酶,用來防止限制酶降解細(xì)菌基因中的相應(yīng)序列。

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