臨床生化檢驗中常見問題解析
為了提高臨床檢驗的工作效率和操作水平，本文基于有關(guān)工作經(jīng)驗談?wù)勗谂R床生化檢驗中遇到的一些常見問題以及一些認識和看法。下面是yjbys小編為大家?guī)淼呐R床生化檢驗中常見問題解析的知識，歡迎閱讀。
一、導(dǎo)致生化項目校準結(jié)果不良的因素
1、儀器方面
(1)光源燈老化導(dǎo)致儀器發(fā)光不穩(wěn)定造成酶類試驗項目重復(fù)性不良;
(2)孵育系統(tǒng)臟污產(chǎn)生的隨機誤差;
(3)比色杯臟污、劃痕引起外來干擾;
(4)試劑針、樣品針及其密封墊老化造成加樣不準引起校準結(jié)果不良;
(5)清洗機構(gòu)滴水或堵塞造成交叉污染引起結(jié)果不良。
2、試劑方面
(1)試劑劣化引起試劑空白吸光度值變化而造成試劑反應(yīng)效能不良;
(2)校準品失效引起校準結(jié)果靈敏度喪失—標示值和實際值之間的吸光度存在差距。
3、參數(shù)方面
參數(shù)設(shè)置不合理或者錯誤。
二、生化項目測試結(jié)果不良的具體情況分析
當出現(xiàn)測試結(jié)果不良的情況時，首先要分析是所有項目結(jié)果不良還是個別項目結(jié)果不良;結(jié)果不良的項目是否存在規(guī)律性;是采用速率法還是終點法分析的項目;是采用單試劑的還是雙試劑的項目。然后再做針對性的進一步分析:
1、由光路因素造成的結(jié)果不良，現(xiàn)象：速率法酶類項目(主波長340nm)結(jié)果混亂。原因分析:(1)燈泡老化;(2)反應(yīng)槽臟污;(3)水質(zhì)太差;(4)比色杯臟污;(5)比色杯破損;(6)光窗脫落滲水。
2、由加樣系統(tǒng)故障造成的結(jié)果不良，現(xiàn)象:結(jié)果偏低或高，或為零，或為負值。原因分析:(1)樣品針(試劑針)臟污堵塞;(2)水平相對位置有偏移導(dǎo)致加樣不準;(3)注射器密封性不良有氣泡;(4)管路漏氣;(5)脫氣部分不良;(6)樣品針高度不合適會引起SAMPLESH0T的報警;(7)樣品針高度不夠，采集不到樣品，引起項目結(jié)果為零或負值。
3、由試劑因素造成的結(jié)果不良。
(1)試劑變質(zhì)失效將會使反應(yīng)曲線不良;(2)試劑間存在交叉污染也會造成測試結(jié)果不良;(3)此外，還要檢查在更換試劑后，測光點、反應(yīng)方向、上下界線等參數(shù)的設(shè)置是否正確。
4、由攪拌棒造成的結(jié)果不良。
(1)如果單試劑的項目結(jié)果不良，攪拌棒1可能有問題;(2)如果雙試劑的項目結(jié)果不良，攪拌棒1和2都可能有問題;(3)當攪拌棒位置偏移或旋轉(zhuǎn)不良，導(dǎo)致反應(yīng)不充分，也會造成結(jié)果不良。
5、由清洗機構(gòu)造成的結(jié)果不良。
(1)管路真空不良致使廢液吸不干凈造成結(jié)果不良;(2)管路堵塞后造成管路滴水、溢水也會導(dǎo)致結(jié)果混亂。
三、全自動生化儀雙試劑項目中出現(xiàn)R1、R2液不能匹配的原因分析
雙試劑項目一段時間做下來后，試劑盒中就會出現(xiàn)R1與R2不能匹配情況，原因是加試劑時試劑針都有附加余量，而且隨加的試劑量不同，附加余量也不同;以日立儀器為例，在日立生化儀(如7060)操作手冊上有個關(guān)于“為防止試劑被稀釋，在每次吸取試劑時再吸取一定的余量加在設(shè)定量上”的表格如下:
|
試劑設(shè)定量（μl) |
50 |
100 |
150 |
200 |
250 |
300 |
350 |
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附加余量（μl) |
13 |
16 |
19 |
23 |
26 |
29 |
32 |
舉個例子,做ALT項目,反應(yīng)試劑參數(shù),R2為50μl,R1為200μl,R2:R1=1:4
日立7060生化儀實際做時R2要吸掉63μl,R1吸掉223μl,R2:R1=1:3.54，這個吸樣比例與實際需要的比例(試劑盒標示的比例)失衡!時間一久，就會造成R2已經(jīng)用完而R1還剩余很多的情況。
四、生化檢測過程中引起交叉污染的原因分類
交叉污染是生化儀使用中常見的現(xiàn)象，簡單理解為在A項目測定中所使用的試劑、樣本、反應(yīng)產(chǎn)物、清洗劑等對B項目的測定產(chǎn)生了不良影響的現(xiàn)象，A項目和B項目不一定是相鄰項目。
交叉污染具體類型可分為：(1)樣本針攜帶污染;(2)試劑針攜帶污染;(3)攪拌棒攜帶污染;(4)清洗系統(tǒng)攜帶污染;(5)比色杯污染。
五、特別針對CKMB/CK升高或倒置的原因簡析
在臨床實驗中偶爾會遇到個別臨床標本其CKMB的檢測結(jié)果與CK的.結(jié)果不相符，CK的結(jié)果在正常范圍，而CKMB的檢測結(jié)果卻明顯偏高，甚至出現(xiàn)CKMB的結(jié)果大于CK的現(xiàn)象，分析原因如下：
1、試劑因素，主要表現(xiàn)為試劑污染或使用已過有效期的試劑。
2、儀器因素，市面上CKMB的校準品或質(zhì)控品較少見，而且其價格也較其他酶類校準品高得多。因此，一般醫(yī)院都未使用CKMB校準品和質(zhì)控品，而是采用廠家試劑盒使用說明書提供的理論因素，在理論因素設(shè)置時，不同儀器略有差異。
3、方法學因素，肌酸激酶CK是由B、M兩種不同亞基組成的二聚體，所以CK有三種同工酶即CKMM、CKMB、CKBB。CKBB主要存在于腦組織、胃腸道及子宮平滑肌中，腦組織中幾乎全為CKBB，CKMB主要存在于心肌組織中，CKMM主要存在于骨骼肌組織中。在正常人血清中幾乎無CKBB或極微量。理論上CKMB的活性是不可能大于CK活性的。目前常用的檢測CKMB的方法是免疫抑制法，出現(xiàn)CKMB>CK的情況就是可能由這種方法的檢測原理造成的。在人體中正常情況下CKBB很少，可忽略，而免疫抑制法就是建立在忽略CKBB的基礎(chǔ)上的。即用抗CKM單體的抗體將M亞基完全抑制，所以CKMM會失去活性，而CKMB活性會失去一半，這樣測出的活性實際就是CKMB的一半，所以CKMB的活性應(yīng)該為測定的2倍。但如果存在CKBB就會使結(jié)果偏高，即測定的CKMB活性= CKMB+2CKBB。如果CKBB>CKMM，由于結(jié)果要乘2，也就是說2CKBB+CKMB>CKBB+CKMB+CKMM，即測得的CKMB活性>CK活性。
4、溶血因素，因紅細胞內(nèi)含有大量的腺苷酸激酶(AK)從而催化ADP反應(yīng)生成ATP而引起NADPH的吸光度的改變，使CK和CKMB測定結(jié)果假性偏高。CKMB是CK-B×2，假性偏高較CKMM更明顯，同時CKMB參考范圍較小，可能出現(xiàn)CKMB大于CK或CK結(jié)果在正常范圍內(nèi)，而CKMB結(jié)果卻明顯偏高。
5、隨機誤差，如吸到小氣泡等。
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