艾滋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程
中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心繼發(fā)布《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009 年版)》后，近日即將發(fā)布 2015 年版《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》，此規(guī)范堪稱艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的「紅寶書」，適用于疾病控制中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)療機(jī)構(gòu)的艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室的 HIV 檢測(cè)技術(shù)操作。下面是yjbys小編為大家?guī)?lái)的艾滋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程的知識(shí)，歡迎閱讀。
檢測(cè)項(xiàng)目的樣品種類
1 HIV 抗體檢測(cè)：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。
2 HIV 抗原檢測(cè)：全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液。
3 T 淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定：EDTA 或肝素抗凝全血。
4 HIV-1 病毒載量、基因型、耐藥檢測(cè)：血漿、濾紙干血斑(DBS)。
5 HIV 核酸定性與定量、基因型檢測(cè)和 HIV-1 分離培養(yǎng)：淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMC)及全血。
當(dāng)然，實(shí)驗(yàn)室最常用的仍然是血液標(biāo)本，其他只作為補(bǔ)充樣本。
HIV 抗體檢測(cè)
HIV 抗體檢測(cè)是艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的優(yōu)先選擇項(xiàng)目，在國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)初篩實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最廣泛。
1 初篩方法
(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
ELISA 法檢測(cè) HIV 抗體是 HIV 初篩實(shí)驗(yàn)室最常用最普遍的方法，目前檢測(cè)試劑已經(jīng)發(fā)展到第四代，即同時(shí)檢測(cè)血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗體，秉承「寧可錯(cuò)殺一千，不可漏網(wǎng)一個(gè)」的革命精神，其靈敏度遠(yuǎn)高于特異性，直叫 HIV 抗體無(wú)處遁形。
(2)化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)(CIA/IFA)
這個(gè)試驗(yàn)方法是近 10 年迅猛發(fā)展的一種新型檢測(cè)方法，其采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測(cè)抗體，也可聯(lián)合檢測(cè)抗原抗體，用發(fā)光或熒光儀測(cè)定結(jié)果，其靈敏度較 ELISA 有了進(jìn)一步的提高，同時(shí)帶來(lái)的是檢測(cè)成本的增加和假陽(yáng)性率的增高。
(3)快速檢測(cè)(RT)方法
此類方法操作簡(jiǎn)便快速，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診檢測(cè)，但靈敏度和特異性遠(yuǎn)不如 ELISA 和發(fā)光法，但是經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，也有一定的市場(chǎng)影響力。主要包括以下幾種方法：明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)、免疫滲濾試驗(yàn)、免疫層析試驗(yàn)。
2 確認(rèn)實(shí)驗(yàn)
(1)免疫印跡試驗(yàn)(WB)
WB 采用間接法檢測(cè)樣品中的抗 HIV-1/HIV-2 特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分離開(kāi)來(lái)，經(jīng)過(guò)一系列處理后，硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結(jié)合的抗體條帶，從而確診抗體的存在。
(2)條帶/線性免疫試驗(yàn)(RIBA/LIA)
實(shí)驗(yàn)原理基本同 WB 法，不再贅述。
HIV-1 抗原檢測(cè)
1 篩查實(shí)驗(yàn)
(1)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA 法)：即第四代抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑盒�？贵w包被固相反應(yīng)孔(管)的底部，待測(cè)樣本中 P24 抗原與包被抗體形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶(HRP)標(biāo)記的 HIV-1 抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。因同時(shí)檢測(cè)抗原抗體，靈敏度大大提高，有效縮短了 HIV 感染的檢測(cè)窗口期，但因試劑成本較高，在普通篩查實(shí)驗(yàn)室推廣有一定難度。
(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：待測(cè)樣品的 p24 抗原與包被在固相孔(管)內(nèi)的 p24 抗體結(jié)合，并被生物素標(biāo)記的 p24 抗體識(shí)別。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用前景不明朗，需要熒光檢測(cè)設(shè)備，成本較高。
(3)電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)：待測(cè)樣品的 p24 抗原與包被抗體的磁性微粒和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體在反應(yīng)管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標(biāo)記抗體復(fù)合物。
(4)抗原抗體快速檢測(cè)法：同快速方法(RT)檢測(cè)抗體，不同之處是用 HIV 抗體包被載體，檢測(cè)靈敏度同樣較差。
2 中和試驗(yàn)
中和試驗(yàn)主要是 p24 抗原檢測(cè)的補(bǔ)充試驗(yàn)，還可做 HIV-1RNA 的定性或定量檢測(cè)，以排除篩查試驗(yàn)的假陽(yáng)性。
(1)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA 法)：待檢樣品先與中和劑(p24 抗原的抗體)共同孵育，如果樣品中存在 p24 抗原，中和抗體將與之結(jié)合形成復(fù)合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結(jié)合。
(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：原理和檢測(cè)步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA 法)，中和率 ≥ 60 %，認(rèn)為樣品中的 p24 抗原是真陽(yáng)性。
(3)電化學(xué)發(fā)光法 (ECLIA)：原理和檢測(cè)步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA 法)，中和率大于 50%，認(rèn)為樣品中的 p24 抗原是真陽(yáng)性。
HIV 核酸檢測(cè)
目前國(guó)內(nèi) HIV 核酸檢測(cè)試劑主要為 Taqman 實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測(cè)試劑，可檢測(cè)血漿、血清、組織器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于檢測(cè) RNA/DNA。全球目前正式用于臨床診斷 HIV-1 急性期感染的`核酸檢測(cè)試劑比較少，主要是美國(guó) FDA 批準(zhǔn)的 Gen-Probe 公司生產(chǎn)的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性檢測(cè)試劑和歐盟批準(zhǔn)的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性檢測(cè)試劑。
臨床診斷相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告
HIV 檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的檢測(cè)過(guò)程一般經(jīng)歷兩個(gè)階段，初篩和復(fù)檢程序。以 HIV 抗體檢測(cè)為例，具體流程如下：
試劑 1 進(jìn)行初篩，結(jié)果無(wú)反應(yīng)，報(bào)告「HIV 抗體陰性」;結(jié)果有反應(yīng)，不能出具陽(yáng)性報(bào)告，必須進(jìn)入復(fù)檢試驗(yàn)。對(duì)初篩有反應(yīng)的樣品，用原有試劑雙份或雙孔進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)(或者兩種試劑復(fù)檢)，如均無(wú)反應(yīng)，報(bào)告「HIV 抗體陰性」;如均有反應(yīng)或一個(gè)有反應(yīng)一個(gè)無(wú)反應(yīng)，進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)(抗體確證試驗(yàn)和 HIV-1 核酸試驗(yàn))，報(bào)告 HIV 感染待確定。
目前大部分臨床實(shí)驗(yàn)室為艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室，開(kāi)展常規(guī)初篩實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果初步復(fù)檢后送省市 CDC 或當(dāng)?shù)仄渌_認(rèn)實(shí)驗(yàn)室做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。臨床診斷篩查檢測(cè)流程見(jiàn)下圖：
目前國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室多采用「初篩抗體+WB 法確認(rèn)」等兩步法進(jìn)行 HIV 檢測(cè)及確診，并嚴(yán)格進(jìn)行人員、儀器、方法學(xué)質(zhì)量控制，建立了遍布全國(guó)的臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)的初篩實(shí)驗(yàn)室及省市 CDC 的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，基本滿足了日益增長(zhǎng)的艾滋病病人的檢測(cè)及病情的變化的監(jiān)測(cè)。
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