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檢驗(yàn)技師考點(diǎn)：抗血清的純化與保存
抗血清的純化與保存：除抗體外血清中含有多種其他蛋白成分。為了避免這些蛋白質(zhì)干擾抗體(免疫球蛋白)標(biāo)記反應(yīng)和抗原抗體反應(yīng)，抗血清可經(jīng)過(guò)純化以獲得單一的機(jī)體(常為IgG)組分。
常用的純化IgG的方法為飽和硫酸胺鹽析和層析法。蛋白質(zhì)在不同的鹽濃度的溶液中，其溶解度不一樣，鹽離子干擾蛋白質(zhì)和水分子間氫鍵形成，因?yàn)樗?mdash;鹽結(jié)合比水—蛋白質(zhì)結(jié)合更穩(wěn)定，蛋白質(zhì)即可從溶液中沉淀出來(lái)。
蛋白質(zhì)分子越大，沉淀時(shí)所需鹽離子濃度越低。
免疫球蛋白(Mr 1.5×105)比血清中主要蛋白質(zhì)白蛋白(M r 6.7×104)的分子大得多，抗體在30%—50%飽和度的硫酸鹽中析出，而白蛋白需在70%—80%飽和度才析出，因此常用33%飽和度的硫酸胺純化血清中的IgG.鹽析時(shí)為了減少抗體變性，需在4℃進(jìn)行，同時(shí)用pH8.0緩沖液稀釋抗血清，以減少蛋白濃度過(guò)高而發(fā)生共沉淀。
銨鹽的溶解度不隨溫度變化而明顯改變，0℃和25℃僅差3%，而鈉鹽則相差5倍，因此常在低溫沉淀時(shí)用銨鹽，室溫沉淀用鈉鹽。銨鹽對(duì)抗體的標(biāo)記反應(yīng)(如FITC和biotin標(biāo)記時(shí))有一定的干擾作用。
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