臨床微生物標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的現(xiàn)狀與展望

　　標本的采集及轉(zhuǎn)運是臨床微生物實驗室分析前檢驗的一個重要的組成部分，正確的采集及轉(zhuǎn)運系統(tǒng)直接關(guān)系到致病菌培養(yǎng)的陽性率及正確率的高低，是臨床微生物檢驗成功的關(guān)鍵。下面是yjbys小編為大家?guī)�來的臨床微生物標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的現(xiàn)狀與展望的知識，歡迎閱讀。

　　一、我國臨床微生物分析前檢驗現(xiàn)狀

　　目前，我國臨床微生物檢驗分析前檢驗領(lǐng)域還存在不少問題，如很多醫(yī)院都存在標本采集方式不正確、運送時間過長和儲存溫度不適宜等情況。近年來，隨著臨床微生物學者們的呼吁和相關(guān)學術(shù)討論的深入，臨床微生物分析前檢驗的重要性已經(jīng)逐漸被醫(yī)學同行們所認可。目前我國臨床微生物學分析前檢驗的關(guān)注點主要集中于檢驗標本是否合格、有無進行不合格標本的退檢及與臨床的溝通等，而影響臨床微生物檢驗結(jié)果的一個重要因素———標本轉(zhuǎn)送容器的質(zhì)量卻很少受到關(guān)注。

　　與臨床生物化學、臨床免疫學和臨床血液學檢驗相比，臨床微生物檢驗標本類型復雜，故轉(zhuǎn)運容器的制作與標準化也要復雜得多。臨床生物化學、臨床免疫學和臨床血液學檢驗以血標本為主，相關(guān)的標準化采血管的制作也已成熟并應用于臨床，對提高檢驗結(jié)果質(zhì)量以及結(jié)果的標準化具有重要意義。臨床微生物檢驗標本類型具有多樣性，有固體(如組織)、半固體(如糞便)和不同黏度的流體(如痰、膿、抽吸物、血液和尿液等)。因此，相應的存放樣本的容器形狀和大小也具有多樣性�；�本上，在我國臨床微生物檢驗實際應用的標本轉(zhuǎn)運容器中，除了血培養(yǎng)瓶得到標準化和規(guī)范之外，其他類型的標本采集和轉(zhuǎn)送系統(tǒng)或多或少都存在一些問題，如轉(zhuǎn)運容器密封性不夠、未達到無菌要求和容易出現(xiàn)泄露等，極大地影響了臨床微生物檢驗的質(zhì)量。

　　由于不同標本黏稠度差異較大，臨床操作與相應的處理就比較困難。近年來這一難題已有所突破，通過液基微生物學將各種類型的微生物標本轉(zhuǎn)化為溶液，可以實現(xiàn)臨床各種標本的標準化，相關(guān)產(chǎn)品也不斷問世。而國內(nèi)對臨床微生物標本采集拭子和運輸系統(tǒng)的質(zhì)量以及采集效率的關(guān)注很少，目前所采用的標本采集及運輸?shù)墓ぞ咻^簡單，多為傳統(tǒng)的纖維拭子、普通的塑料無菌容器等，不能保證病原菌在運送過程中的活力，嚴重影響了臨床微生物檢驗的質(zhì)量。特別是現(xiàn)在越來越多的醫(yī)院開始使用自動化的氣動物流標本傳輸系統(tǒng)，轉(zhuǎn)運容器密封性差，經(jīng)常出現(xiàn)標本泄露，嚴重影響檢驗質(zhì)量，檢驗人員也日益意識到標本轉(zhuǎn)運系統(tǒng)質(zhì)量的重要性。同時，臨床微生物檢驗一個重要的發(fā)展方向是自動化，而目前五花八門的轉(zhuǎn)運容器無法適應這一發(fā)展趨勢。因此，現(xiàn)代檢驗的氣動物流標本運輸系統(tǒng)及臨床微生物檢驗全自動化發(fā)展方向均呼吁臨床微生物檢驗領(lǐng)域采用高質(zhì)量的標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。

　　二、新型標本采集及轉(zhuǎn)運系統(tǒng)

　　1. 尿液標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)：目前應用較多新型的尿液轉(zhuǎn)運系統(tǒng)主要為Uriswab尿液收集系統(tǒng)以及Vacutainer Plus Urine C&S Preservative Tubes。Uriswab尿液收集系統(tǒng)是主要由海綿拭子組成，海綿中含有硼酸和甲酸鈉的聚合物，接觸到尿液會進行活化，可減少運輸過程中出現(xiàn)菌群過度生長或過度死亡的現(xiàn)象。此系統(tǒng)操作簡單，安全且無泄漏，在冷藏或室內(nèi)溫度下保持細菌生存力可達48 h。另一種新型的尿液采集轉(zhuǎn)運系統(tǒng)為Vacutainer Plus Urine C&S Preservative Tubes，它自帶凍干粉保存劑(硼酸緩沖液、甲酸鈉和硼酸鈉)，可使尿液在非冷藏條件下儲存48 h。

　　2. 痰標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)：痰標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)制作最大的難點為痰標本具有明顯的非均質(zhì)性，細菌等成分的分布濃度很不均勻，故痰液稀釋在微生物分離培養(yǎng)中有重要意義。傳統(tǒng)的胰酶預處理痰液的方法，耗時較長，應用液在常溫下不易保存，且反復凍融容易失效，往往需現(xiàn)配現(xiàn)用。a-糜蛋白酶溶液消化所需時間更短，但成本較高。新型的痰標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)采用的是SL solution來進行痰標本液化，其有效成分是二硫蘇糖醇(dithiothreitol, DTT)，其溶解痰液的溶劑裝在無菌塑料管里，無須再進行水化，且其在室溫下穩(wěn)定，保質(zhì)期長，可以隨取隨用，方便檢驗人員的臨床操作。

　　3. 糞便標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)：FecalSwab是一種采集、運輸、儲存便樣的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，其配方是為保持腸桿菌科細菌的生存力而特別設計。其專門設計的植絨拭子，可以精準地采集標本。用途較廣，樣本可以直接在血培養(yǎng)皿上進行畫線或者分離，也可以分為等份試樣后轉(zhuǎn)移至選擇性增菌培養(yǎng)液中再進行操作，可用于PCR。有研究表明，F(xiàn)ecalSwab在保持糞便中病原體活力方面較Eswab及其他常用的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)(如干燥容器及Amies凝膠拭子)有明顯優(yōu)勢。

　　4. 細胞及核酸標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)：Cymol是一種用于細胞及核酸的運輸和儲存的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。三種酒精混合液有利于標本的保存，并可抑制普通菌群過度生長�；�質(zhì)可保持核酸的穩(wěn)定性，可通過基于RNA與DNA的分子核酸檢測，檢測人乳頭瘤病毒、衣原體和淋病奈瑟菌。Enat是一種為分子生物應用而設計的運送核酸的系統(tǒng)，配方中加入了去污劑，保證樣本達到穩(wěn)定狀態(tài)。還可對傳染性病原體進行滅活，降低檢驗人員接觸未知病毒的風險。

　　5. 病毒標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)：新型通用病毒采集運輸系統(tǒng)可用于病毒、支原體、衣原體及脲原體的采集運輸�？稍谑覝鼗虮�上(2-25 ℃)儲存病原體至少48 h。含有低溫防護劑用于病毒及支原體在冰上的保存，基質(zhì)內(nèi)含抑制細菌及真菌生長的抗菌藥物以防止污染。

　　6. 其他轉(zhuǎn)運系統(tǒng)：2005年研發(fā)的Eswab拭子，是目前微生物技術(shù)較先進的運輸系統(tǒng)，它能在室溫和冰箱溫度下保持需氧菌、厭氧菌和苛養(yǎng)菌生存力長達48 h，是一種多用途液基采集儲存系統(tǒng)。Eswab由一個植絨拭子和一個1 ml的Amies液體管組成使樣本采集過程的損傷變得更低，并且能收集更多的樣本，立即洗脫進液相中以進一步多重分析。有學者報道：Eswab中病原菌的復蘇率是其他轉(zhuǎn)運系統(tǒng)(MaxV和Remel BactiSwab)的十倍以上。

　　三、不同標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)比較研究

　　目前，關(guān)于不同標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的比較研究，只有來自國外學者的研究資料。不同的病原菌、轉(zhuǎn)運溫度及轉(zhuǎn)運時間對于轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的要求也有所不同。用無炭的Amies瓊脂凝膠轉(zhuǎn)運金黃色葡萄球菌，細菌活力最長可達18 d;Gladstone等對105篇文章做出的Meta分析顯示：對于肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)運，尼龍植絨拭子在標本的吸收和釋放方面有較好作用;而在轉(zhuǎn)運介質(zhì)方面，WHO推薦的牛奶、胰蛋白胨、葡萄糖、甘油組成的介質(zhì)(STGG)比只有牛奶，葡萄糖及甘油組成的介質(zhì)(SGG)有較高的復蘇率。在對于厭氧菌的轉(zhuǎn)運過程中，采用Eswab轉(zhuǎn)運的標本，其細菌的復活率都明顯高于MaxV系統(tǒng)和RBS系統(tǒng)。Hirvonen和Kaukoranta對12株ATCC標準菌株及328株臨床糞便標本的研究發(fā)現(xiàn)：Eswab和FecalSwab優(yōu)于傳統(tǒng)的標本轉(zhuǎn)送系統(tǒng)(Amies gel swabs和dry containers)，Eswab更適合糞便標本的采集與轉(zhuǎn)送，但FecalSwab在不同溫度的標本保存方面具有較明顯的優(yōu)勢。

　　在不同的環(huán)境下宜選擇不同的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。有研究發(fā)現(xiàn)同是針對厭氧菌的Port-A-Cul轉(zhuǎn)運系統(tǒng)

　　與COMP傳統(tǒng)轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，在4℃時，兩者在保持細菌活力方面都具有較好的作用;而在室溫下，Port-A-Cul轉(zhuǎn)運系統(tǒng)就比COMP傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)有明顯優(yōu)勢。當樣品不能得到及時的處理或冷藏時，ETA比Amies和Stuarts培養(yǎng)基有較明顯優(yōu)勢。

　　四、標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)在多重耐藥菌株分離中的應用

　　新型的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)對于多重耐藥(Multidrug resistance, MDR)菌株的分離有重要的意義。有研究表明，Eswab在轉(zhuǎn)移多重耐藥鮑曼不動桿菌時，其在0、1、24和48 h的復活率均明顯高于普通的標準轉(zhuǎn)運系統(tǒng)(standard swab system, SSS)2倍以上。即使是在轉(zhuǎn)運時間延長或者接種液較少的情況下，Eswab轉(zhuǎn)運的標本，其病原體仍然能保持較高的復活率。在冰凍的情況下，接種可至少延遲2周。Lerner等學者成功將Eswab轉(zhuǎn)運系統(tǒng)用于碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(carbapenem-ressistant Enterobacteriaceae, CRE)的分離培養(yǎng)，取得了較好的效果。Smismans等將Eswab轉(zhuǎn)運系統(tǒng)應用于MRSA菌株的分離，并取得了Venturi swab轉(zhuǎn)運系統(tǒng)3.6倍的標本采集與復蘇效率�？梢姡�新型標本采集與運送系統(tǒng)在多重耐藥的分離中也發(fā)揮著重要作用。

　　五、標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的未來發(fā)展展望

　　近年來，微生物檢驗的標準化和自動化已成為各個實驗室的發(fā)展方向。自動化的檢驗能夠提高檢驗質(zhì)量，提高檢驗效率，減少人為誤差，并能夠節(jié)省人力，提高生物安全性等。采用方便、快捷、高性能的標本轉(zhuǎn)運系統(tǒng)在自動化的進程有重要意義。標本采集與運送系統(tǒng)領(lǐng)域未來的發(fā)展與研究將集中于：(1)進一步立足臨床需求，開發(fā)與完善臨床微生物標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，提升臨床微生物檢驗質(zhì)量;(2)進一步評估不同標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)在不同目標病原菌、不同標本運送溫度和不同儲存溫度下的差異，以根據(jù)實際情況合理選擇適合所在實驗室的轉(zhuǎn)運系統(tǒng);(3)研究不同標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)在感染控制中的應用，特別是多重耐藥菌的分離。

　　我國臨床微生物學家對微生物標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)加強了重視，各個醫(yī)院也都意識到標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的重要性，制定了微生物標本采集手冊與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)相關(guān)的操作指南。目前，制約標本轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的發(fā)展的一個重要因素為臨床微生物檢驗的收費問題。國內(nèi)的微生物檢驗成本較高，收費較低，缺乏資金使得微生物實驗室在改進標本采集和轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的過程中舉步維艱。筆者建議在目前的收費系統(tǒng)中增加單收材料費，這有利于臨床微生物檢驗質(zhì)量的提升。希望本文的介紹可以推動各種新型轉(zhuǎn)運系統(tǒng)在我國臨床微生物檢驗領(lǐng)域的應用，進一步提升臨床微生物檢驗的質(zhì)量，促進微生物檢驗標準化及自動化的發(fā)展。同時，也希望中國臨床微生物學者積極關(guān)注新型標本采集與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，進行臨床研究、評估與應用，并總結(jié)相關(guān)經(jīng)驗與資料，向國際同行展示來自中國的循證臨床微生物學資料，提升中國臨床微生物界在國際上的影響力!

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